蛋白質抗原表位完整性檢測:利用 Western Blot 技術,對經膜再生液處理前后的膜進行檢測。選取已知的目標蛋白,先使用一抗進行孵育、顯色,記錄初始信號強度;經過膜再生液處理后,再次用相同一抗孵育并檢測。對比兩次檢測的信號強度,若信號強度損失較小(如不超過 15%),說明膜再生液能較好地保留蛋白質抗原表位,性能良好。此外,還可使用抗原表位特異性抗體,檢測特定抗原表位的保留情況,更精準地評估膜再生液對蛋白質結構的保護能力。
膜抗原結合能力評估:將再生后的膜用于新一輪的 Western Blot 實驗,與未經再生處理的膜進行對比。在相同實驗條件下,使用相同的一抗、二抗和檢測方法,檢測膜上蛋白質與抗體的結合效率。通過分析條帶的清晰度、亮度以及背景信號強度,判斷膜再生液是否影響膜的抗原結合能力。若再生后膜的檢測條帶與未處理膜相比,清晰度和亮度接近,且背景信號無明顯升高,表明膜再生液能有效恢復膜的抗原結合能力。
重復性實驗驗證:對同一膜進行多次抗體剝離和再生處理,重復進行 Western Blot 實驗。記錄每次實驗中目標蛋白的檢測結果,包括條帶強度、遷移率等數據。計算多次實驗結果的變異系數(CV),若變異系數較小(如小于 10%),說明膜再生液在多次使用過程中能保持穩定的性能,使膜重復使用時實驗結果具有良好的重復性 。
與不同膜類型的兼容性測試:分別選取硝酸纖維素膜(NC 膜)和聚偏二氟乙烯膜(PVDF 膜),使用膜再生液進行處理,然后進行 Western Blot 實驗。對比不同膜類型在處理后的蛋白質檢測效果,包括抗體結合效率、條帶清晰度等指標。若膜再生液在不同膜類型上均能表現出良好的再生效果,說明其兼容性強,適用范圍廣。
對不同種屬一抗的兼容性測試:使用來自不同種屬(如鼠源、兔源、羊源)的一抗,對經膜再生液處理后的膜進行 Western Blot 實驗。觀察不同種屬一抗與膜上抗原的結合情況,對比檢測信號強度和特異性。若膜再生液對各種屬一抗均無明顯抑制或干擾作用,且能保證一抗與抗原有效結合,說明該膜再生液對不同種屬一抗具有良好的兼容性 。
抗氧化性能測試:通過檢測膜上蛋白質的氧化程度,評估膜再生液中抗氧化劑的效果。可使用氧化特異性抗體,檢測蛋白質中被氧化的氨基酸殘基(如甲硫氨酸、半胱氨酸的氧化產物)。將未經膜再生液處理和處理后的膜進行對比,若處理后膜上蛋白質的氧化信號明顯降低,表明膜再生液的抗氧化性能良好,能有效保護蛋白質免受氧化損傷 。