除了 Thermo CLONED AMV FIRST STRA SYN KIT,還有不少在分子生物學研究中廣泛應用的逆轉錄試劑盒,它們各有特點,適用于不同的實驗需求。
高容量 cDNA 逆轉錄試劑盒(High - Capacity cDNA Reverse Transcription Kit):由 Thermo Fisher Scientific 推出,完成一次逆轉錄反應耗時 120 分鐘 。該試劑盒能夠從多種 RNA 樣本,如總 RNA 或 mRNA 中高效合成 cDNA,為后續(xù)大規(guī)模的基因表達分析、分子克隆等實驗提供充足的模板,適用于對 cDNA 產量有較高要求的實驗場景,例如構建 cDNA 文庫時,可獲得豐富的 cDNA 資源。
SuperScript™ III 第一鏈合成系統(tǒng)(SuperScript™ III First - Strand Synthesis System for RT - PCR):同樣來自 Thermo Fisher Scientific,專為從純化的 poly (A)+ 或總 RNA 合成第一鏈 cDNA 而優(yōu)化。其使用的 SuperScript III 逆轉錄酶,可在較寬溫度范圍工作,對于具有復雜二級結構的 RNA 模板,能通過適當提高反應溫度來破壞結構,保障逆轉錄順利進行,在研究一些富含 GC 區(qū)域的基因表達時優(yōu)勢明顯,能準確將對應的 RNA 逆轉錄為 cDNA。
Revertaid 第一鏈 cDNA 合成試劑盒(Revertaid First Strand cDNA Synthesis Kit):此試劑盒的組成十分全面,包含 Revertaid 逆轉錄酶、RiboLock RNase 抑制劑、5X 反應緩沖液、dNTP mix、oligo (dT) 18 引物、隨機六聚體引物、對照 GAPDH RNA、正向和反向 GAPDH 引物以及無核酸酶水 。它在 60 分鐘內即可完成逆轉錄反應,對 RNA 模板的適用性廣,無論是常規(guī)的 mRNA,還是一些具有特殊結構的 RNA,都能實現高效逆轉錄,常用于基礎科研中對細胞內各類基因表達情況的初步檢測。
TaqMan™逆轉錄試劑(TaqMan™ Reverse Transcription Reagents):該試劑盒專為逆轉錄反應設計,最佳反應溫度為 42°C,采用 Multiscribe 逆轉錄酶 。它與 TaqMan 實時定量 PCR 技術配套使用時效果,能夠精準地將 RNA 逆轉錄為 cDNA,并為后續(xù)基于 TaqMan 探針的定量 PCR 提供高質量模板,在對基因表達進行精準定量分析,如疾病相關基因的表達量變化研究中應用廣泛。
Roche 逆轉錄試劑盒(RT - PCR Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit):核心成分 Transcriptor 逆轉錄酶是在大腸桿菌中重組表達的,具有 RNA 指導的 DNA 聚合酶活性、DNA 依賴的 DNA 聚合酶活性、解旋活性以及可降解 RNA - DNA 雜合鏈中 RNA 的 RNase H 活性,這使得逆轉錄后無需額外進行耗時的 RNase H 孵育步驟,縮短了反應時間并降低成本 。該酶熱穩(wěn)定性高,可在高達 65°C 的溫度下工作,能合成長達 14 kb 的 cDNA 產物,特別適用于具有高二級結構的富含 GC 模板的逆轉錄,同時試劑盒提供了隨機六聚體引物和錨定 oligo (dT) 18 引物等多種引物選擇,滿足不同類型 RNA 逆轉錄需求,在長片段基因的研究、復雜 RNA 樣本的分析中表現出色。
逆轉錄系統(tǒng)(Reverse Transcription System - Promega):利用 AMV 逆轉錄酶,可在 15 分鐘內高效地將 RNA 逆轉錄為 cDNA,合成的 cDNA 可直接用于多次 PCR 擴增 。試劑盒中同時包含 oligo (dT) 15 和隨機引物,適用于幾乎任何 RNA 來源的逆轉錄,還提供了一個 1.2 kb 的聚腺苷酸化 RNA 轉錄本作為 cDNA 合成的對照模板,方便研究人員優(yōu)化實驗參數、排查實驗問題,在對實驗時間要求較高,且需要快速獲得可靠逆轉錄結果的情況下,如緊急的病毒 RNA 檢測中較為適用。
Scriptum 第一鏈 cDNA 合成試劑盒(Scriptum First cDNA Synthesis Kit):涵蓋了第一鏈 cDNA 合成所需的所有試劑,使用優(yōu)質的逆轉錄酶、超純 dNTPs 和優(yōu)化的反應緩沖液,確保結果具有高重復性 。其逆轉錄酶是經重組生產的 M - MLV 逆轉錄酶改良版本,消除了 RNase H 活性且提高了熱穩(wěn)定性,能夠合成高度結構化的長 cDNA 片段,實現極其靈敏且高度特異的 RT - PCR 反應,可用于 DNA 標記等實驗,在對 cDNA 質量和實驗特異性要求嚴格的分子生物學實驗,如基因功能驗證相關的精確表達分析中發(fā)揮重要作用。
這些不同的逆轉錄試劑盒,憑借各自的性能和特點,為科研人員在基因表達分析、病毒學研究、分子克隆等諸多領域的研究工作提供了多樣化的選擇